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毛細管電泳的原理和用途介紹
更新時間:2012-05-14 點擊次數(shù):4516

 

什么是毛細管電泳?毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)又叫毛細管電泳(HPCE), 是近年來發(fā)展zui快的分析方法之一。毛細管電泳是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分析技術(shù)。毛細管電泳是將電泳的場所置于毛細管中的一種電泳分離方法,它的裝置結(jié)構(gòu)通常由高壓電源、鉑電極、緩沖液池、樣品池、毛細管、檢測器和分析記錄儀構(gòu)成
。毛細管電泳的原理和過程是怎樣的?毛細管電泳分離的基本流程有進樣、分離和檢測三步驟。進樣:毛細管電泳的基本裝置是一根充滿電泳緩沖液的毛細管,與毛細管兩端相連的兩個小瓶微量樣品從毛細管的一端通過壓力電遷移進入毛細管;分離:電泳時,與高壓電源連接的兩個電極分別浸人毛細管兩端小瓶的緩沖液中。樣品朝與自身所帶電荷極性相反的電極方向泳動。各組分因其分子大小、所帶電荷數(shù)、等電點等性質(zhì)的不同而遷移速率不同,依次移動至毛細管輸出端附近的光檢測器,檢測、記錄吸光度,并在屏幕上以遷移時間為橫坐標,吸光度為縱坐標將各組分以吸收峰的形式動態(tài)直觀地記錄下來;檢測:檢測的原理基于被測組分和背景電解質(zhì)的吸光度不同,當(dāng)被測組分通過檢測窗時,吸光度發(fā)生的變化服從朗伯-比爾定律,即在一定的實驗條件下,吸光度與被測組分的濃度成正比。
毛細管電泳和普通電泳相比較的優(yōu)勢在哪里?通常電流通過導(dǎo)體時都會產(chǎn)生焦耳熱。傳統(tǒng)平板凝膠電泳的zui大局限性在于,其無法克服兩端高電壓帶來的焦耳熱所產(chǎn)生的負面影響。焦耳熱可使篩分介質(zhì)內(nèi)部出現(xiàn)溫度、粘度及分離速度的不均一,影響遷移、降低效率、使區(qū)帶變寬。由于這種負面影響與電場強度成正比,所以極大地限制了高電壓的引入,也難以提高電泳速度。毛細管電泳使樣品在一根極細的柱子中進行分離。細柱可減小電流,使焦耳熱的產(chǎn)生減少;同時又增大了散熱面積,提高散熱效率,大大降低了管中心與管壁間的溫差,減少了柱子徑向上的各種梯度差,保證了分離。因此可以加大電場強度,達到100200V/cm,全面提高分離質(zhì)量。
毛細管電泳主要用于哪些實驗?總的來說,毛細管電泳可用于對有機化合物、無機離子、中性分子、手性化合物、蛋白質(zhì)和多肽、DNA和核酸片段的分析。具體來說,常見的應(yīng)用范圍有以下幾個方面:
1)高速DNA測序:由于人類基因組工程的提出,高速DNA測序引起了廣泛注意,由于對核苷酸及其聚合物*的分辨率,毛細管電泳在DNA測序中的應(yīng)用潛力也受到重視。在高電場和使用陣列毛細管條件下,其潛在的測序能力遠遠超過了現(xiàn)有方法。
2)手性分離現(xiàn)代社會中,手性分析常牽涉到人類生命、動植物的生存和演化,在藥物研究和生產(chǎn)中也是必須考慮的問題,研究證明手性手細管電泳是zui簡單的手性分析方法。手性應(yīng)用的研究包括異構(gòu)體拆分、能度測定、反應(yīng)動力學(xué)研究、手性藥物篩查等。
3)蛋白質(zhì)分析蛋白質(zhì)分離分析也是毛細管電泳的主要應(yīng)用方向,包括:蛋白和多肽的純度分析、結(jié)構(gòu)研究、結(jié)合蛋白的研究、生化及其過程分析、物化常數(shù)的測定,臨床醫(yī)學(xué)研究等。
4)糖分析糖是自然界中廣泛存在的化學(xué)物質(zhì),已發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)中90%以上含有糖堿基;糖在細胞識別以及其它生物分子識別中也具有不可替代的作用。但是由于糖的一些特殊性質(zhì),對它的分離分析有很大的困難。而近年發(fā)展起來的毛細管電泳儀用于糖的分析取得了巨大的成功,成為糖分離分析的有效工具。
5)單細胞分析毛細管電泳既能研究許多細胞構(gòu)成的樣品,也能只研究單個細胞,即單細胞分析。單細胞分析技術(shù)為生命科學(xué)研究打開了新的天地,推動了一系列的新研究的出現(xiàn),已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、免疫學(xué)、血液流變學(xué)、細胞生理學(xué),臨床醫(yī)學(xué),特別是腫瘤研究和器官移植。
6)聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用技術(shù)的研究將是毛細管電泳儀的重大發(fā)展方向之一,與譜、質(zhì)譜等方法的聯(lián)用將會大大提高毛細管電泳儀的應(yīng)用范圍。

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