分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域
更新時(shí)間：2021-04-29 點(diǎn)擊次數(shù)：1989
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分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域
分子篩層析也并非一無是處，其應(yīng)用領(lǐng)域主要包括以下方面：
1）脫鹽：
高分子（如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等）溶液中的低分子量雜質(zhì)，可以用分子篩層析除去，這一操作稱為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速，蛋白質(zhì)和酶類等在脫鹽過程中不易失活，樣品體積可達(dá)柱床體積的25%-30%，為了防止蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度降低會(huì)形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類緩沖液使層析柱平衡，然后加入樣品，再用同樣緩沖液洗脫，收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發(fā)性鹽類。
2）分離提純：
分子篩層析已廣泛用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿等物質(zhì)的分離提純。
3）測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量：
用一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品放入同一凝膠柱內(nèi)，在同一條件下層析，記錄每一分鐘成分的洗脫體積，并以洗脫體積對(duì)分子量的對(duì)數(shù)作圖，在一定分子量范圍內(nèi)可得一直線，即分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定未知物質(zhì)的分子量時(shí)，可將此樣品加在測(cè)定了標(biāo)準(zhǔn)曲線的凝膠柱內(nèi)洗脫后，根據(jù)物質(zhì)的洗脫體積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它的分子量。
4）高分子溶液的濃縮：
通常將Sephadex G-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中，這時(shí)水分和低分子量的物質(zhì)就會(huì)進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部的孔隙中，而高分子物質(zhì)則排阻在凝膠顆粒之外，再經(jīng)離心或過濾，將溶脹的凝膠分離出去，就得到了濃縮的高分子溶液。
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